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武汉会战期间，中共还积极开展敌后游击战争，克服敌占区作战种种不利的环境和条件，发动和依靠群众，或破交、或袭扰、或伏击，予国民党在长江两岸正面战场的作战以主动、有力的战略配合。
八路军高级将领彭德怀就指出，"我们在第二期抗战中，转入到敌人后方作战，是保卫武汉、保卫西北籍以争取持久作战的重要方针之一"。
1938年徐州会战刚刚结束，中共中央就指示有关省区的我党领导机关，要"准备与发动游击战争，组织游击队，建立游击区"，八路军、新四军要积极配合正面战场作战，拖住敌人、迟滞敌人，使敌两面作战，占领区也不能稳固。
1938年5月，毛泽东在给新四军的指示电报中说，"在敌后进行游击战争虽有困难，敌情方面虽较严重，但只要有广大群众活动地区，充分注意指挥的机动灵活，也会能够克服这种困难"。根据中央指示精神，叶挺、项英等新四军领导人向各支队明确任务时强调，"新四军的任务是深入敌人后方，开展广泛的游击战，牵制和分散敌人的兵力，配合友军主力正面作战"。
会战开始之后，八路军以积极的作战行动在冀东地区发起攻击，克服数个县城，并扩展战果发起组织了冀东地区大规模抗日群众武装起义，有力地打乱了日军在部署，牵制了华北日军对华中日军的支援。
1938年6月，新四军四支队以主力积极开展了以破坏安（庆）合（肥）公路沿线和皖中敌后游击为主要内容的作战，多次在公路干道上伏击日军，毙伤敌人多名。7月，八路军主力115师和129师各一部向敌后纵深挺进，开辟了新的抗日根据地。同月，新四军第一支队二团在抗日民众的配合下夜袭镇江车站成功，不仅歼灭驻站日军，而且摧毁了车站设施并破坏了铁轨一段。此外，二支队则于7月6日伏击了自当涂到芜湖的日军一军用列车。
在新四军对日军交通干线连续袭击，"七、八月间，曾动员17万居民破坏交通"之后，日军被迫抽调兵力加强守备。会战激战正酣的8月，我新四军在华东地区积极出击，以机制灵活的战略战术予敌以沉重打击，使日军进攻武汉后顾大为有忧。蒋介石在8月下旬的一份电报中称，"各游击部队迭奏奇功，殊堪嘉慰"。
进入9月，我八路军115师和120师分别在山西南部和五台山地区，以游击战和运动战、伏击战相结合，不仅打退了日军的猖狂进攻，而且取得了显著战果。10月新四军第三支队以顽强的战斗作风，打退了敌顽的连续进攻，歼敌数百，辉煌战绩震动了皖南抗敌前线。新四军敌四支队10月9日在舒六公路伏击了由300辆军车组成的日军大型车队，激战之后毁敌军车65辆，毙伤敌共计140多人。武汉会战后期，"当时武汉吃紧，京芜、京沪国道为敌交通枢纽，受我军不断胜利与威胁，敌不得不抽兵增援"。
作为八路军的总司令，朱德在当时的总结性讲话中指出，"八路军第三期作战有力配合了武汉会战"，不仅大量缴获、消耗和破坏了日军的战争资源，而且迟滞、延缓、打乱了日军的进攻节奏。据统计，自1938年6月至10月的武汉会战期间，仅新四军江南部队就与敌顽作战超过200次，也"用最大的努力，激烈的战斗，在江南战场来执行保卫武汉的战斗，来配合武汉周围的友军"。
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